聽寫的退火的反應條件特別是溫度、 鹽 concentration(s) 和 ph 值的-單鏈 DNA/DNA、 DNA/RNA 和 RNA/RNA 混合動力車。在高短絀，只能之間束與完美的一對一互補形成雙工 ； 低緊縮允許退火之間束與某種程度的基地之間的不匹配。